Laporkan Masalah

ISOLASI DAN CLONING GEN PENYANDI α-AMILASE PADA ISOLAT BAKTERI AMILOLITIK, Bacillus sp. HS32

Almatin Puspa Dewi, Dr. Yekti Asih Purwestri, S.Si., M.Si.

2014 | Tesis | S2 Biologi

Gen penyandi α-amilase dari isolat bakteri amilolitik, Bacillus sp. HS32 telah berhasil diamplifikasi dengan menggunakan metode Polymerase Chain Reaction (PCR) menghasilkan pita berukuran 1,6 kb dan ditransformasikan ke dalam E.coli DH5α dengan menggunakan vektor zero blunt TOPO cloning. Seleksi sel transforman dilakukan dalam medium seleksi yang mengandung kanamycin. Analisis sel transforman dengan metode colony PCR dengan menggunakan primer Ami-F dan Ami-R menghasilkan pita berukuran 1,6 kb dan dengan menggunakan primer universal M13 menghasilkan pita berukuran 1,8 kb. Analisis restriksi plasmid transforman dengan menggunakan enzim restriksi Not1 dan BamH1 menghasilkan 2 pita berukuran 3,5 kb (cloning vector) dan 1,6 kb (insert gene). Hasil sequencing plasmid transforman dan analisis kemiripan nukleotida gen α-amilase dari isolat Bacillus sp. HS32 dengan menggunakan program BLAST terhadap database yang tersedia pada GenBank menunjukkan bahwa gen α-amilase dari isolat bakteri amilolitik, Bacillus sp. HS32 memiliki tingkat kemiripan dengan gen serupa dari Bacillus cereus NC7401 sebesar 96%.

Genes encoding α-amylase of amylolytic bacterial isolate, Bacillus sp. HS32 was successfully amplified by using Polymerase Chain Reaction (PCR) method produced band of 1.6 kb size and transformed into E. coli DH5α by using the zero blunt TOPO cloning vector. Selection of transformed cells was did in a selection medium containing kanamycin. Analysis of transformed cells by colony PCR method using primers Ami-F and Ami-R produced band of 1.6 kb and using M13 universal primers produced band of 1.8 kb size. Restriction Analysis of plasmid transformants by using restriction enzymes Not1 and BamH1 produced 2 bands, they were 3.5 kb (cloning vector) and 1.6 kb (insert gene). The results of sequencing of plasmid transformants and analysis of nucleotide similarity of α-amylase gene from isolates Bacillus sp. HS32 using the BLAST program on available database in the GenBank showed that the α-amylase gene from amylolytic bacterial isolate, Bacillus sp. HS32 had a similarity 96% with corresponding gene of Bacillus cereus NC7401.

Kata Kunci : Cloning gen, α-amilase, PCR, Zero blunt TOPO Cloning


    Tidak tersedia file untuk ditampilkan ke publik.